耐藥細胞株在不加任何條件下直接凍存細胞時，細胞內和外環境中的水都會形成冰晶，能導致細胞內發生機械損傷、電解質升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等，能引起細胞死亡。如向培養液加入保護劑，可使冰點降低。在緩慢的凍結條件下，能使細胞內水份在凍結前透出細胞。貯存在-130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。
細胞復蘇時速度要快，使之迅速通過細胞易受損的-5～0℃，細胞仍能生長，活力受損不大。
耐藥細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養細胞中獲得具有特殊性質或標記的細胞，稱為細胞株。一般認為細胞系是通過單細胞分離培養，或者通過篩選，由單細胞增殖形成的細胞群。在整個培養過程中必須始終存在細胞株的特殊特性或標記。建立耐藥細胞株主要有兩種方法：藥物濃度遞增法和大劑量藥物沖擊法。
1、藥物濃度遞增法
其優點是誘導耐藥細胞藥物劑量逐步增加，細胞培養環境逐漸改變，細胞耐受性較好，狀態較好，但誘導耐藥過程耗時較長，且化療藥物的作用方式與臨床常用的大劑量短療程化療原則有一定差異；
2、藥物大劑量沖擊法
其優點是類似于臨床常用的大劑量化療藥物沖擊療法，但其缺點是藥物濃度較高，細胞培養可能因外環境突變而耐受，細胞狀態難以控制，耐藥能不穩定。
